中山大学松阳洲获国家专利权
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龙图腾网获悉中山大学申请的专利一种用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115725623B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211255343.3,技术领域涉及:C12N15/65;该发明授权一种用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用是由松阳洲;杨悦;何梓彬;马文宾;梁普平;陈昱僖设计研发完成,并于2022-10-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于检测CRISPR‑Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用。本发明所述报告细胞系将纳米荧光素酶基因Nluc与管家基因ACTG1融合表达,避免了细胞内环境变化对纳米荧光素酶Nluc活性的影响;通过Nluc活性的变化反映CRISRP‑Cas蛋白的切割活性,克服了现有GFP的半衰期较长,没有办法快速响应基因位点双链断裂的情况的不足。此外,本发明所述报告细胞系还可用于筛选CRISPR‑Cas蛋白抑制剂。本发明利用构建所得报告细胞系筛选到了能够在细胞内抑制SpCas9切割活性的小分子化合物,筛选过程的操作简单,检测方便,信号稳定。
本发明授权一种用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用在权利要求书中公布了:1.一种用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: S1.在所用报告细胞的管家基因的终止密码子前插入绿色荧光蛋白与分泌型纳米荧光素酶的融合表达基因,筛选成功定点插入融合表达基因的单克隆细胞;所述报告细胞为HEK293细胞,所述管家基因为ACTG1,所述融合表达基因为eGFP-P2A-Nluc,其碱基序列如SEQIDNO.1所示; S2.利用带嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因的慢病毒载体将萤火虫荧光素酶基因随机插入步骤S1所得单克隆细胞的基因组,用嘌呤霉素筛选含萤火虫荧光素酶活性的单克隆细胞,培养得到用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系。
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