广东省科学院动物研究所唐睿获国家专利权
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龙图腾网获悉广东省科学院动物研究所申请的专利一种利用S2和SF9细胞系培养核型多角体病毒的生产工艺获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121182754B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511713994.6,技术领域涉及:C12N7/00;该发明授权一种利用S2和SF9细胞系培养核型多角体病毒的生产工艺是由唐睿;胡文浩;赵雯;俞也频;黎子上;舒本水;樊建庭设计研发完成,并于2025-11-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种利用S2和SF9细胞系培养核型多角体病毒的生产工艺在说明书摘要公布了:本发明公开了一种利用S2或SF9细胞系培养核型多角体病毒的生产工艺。将细胞穿膜肽C105Y与脂质纳米颗粒表面的DSPE‑PEG2000‑Mal连接,然后用其去制成脂质纳米颗粒LNP‑C105Y,并包载核型多角体病毒DNA,获得DNAHcNPV@LNP‑C105Y;将DNAHcNPV@LNP‑C105Y接种到SF9草地贪夜蛾细胞系或S2果蝇细胞系中进行培养,生产核型多角体病毒。本发明以美国白蛾核型多角体病毒为基础,采用薄膜分散‑挤压法合成和制备DNAHcNPV@LNP‑C105Y脂质纳米颗粒包裹美国白蛾核型多角体病毒,接种到SF9与S2细胞系生产美国白蛾核型多角体病毒。本发明对美国白蛾核型多角体病毒生产工艺进行改进,克服现有病毒生产工艺无法脱离美国白蛾活体饲养的缺陷。
本发明授权一种利用S2和SF9细胞系培养核型多角体病毒的生产工艺在权利要求书中公布了:1.一种利用S2或SF9细胞系培养核型多角体病毒的生产方法,其特征在于,包括以下步骤: 将细胞穿膜肽C105Y与脂质纳米颗粒表面的DSPE-PEG2000-Mal连接,然后用其去制成脂质纳米颗粒LNP-C105Y,并包载核型多角体病毒DNA,获得DNAHcNPV@LNP-C105Y; 将DNAHcNPV@LNP-C105Y接种到SF9草地贪夜蛾细胞系或S2果蝇细胞系中进行培养,生产核型多角体病毒; 所述的核型多角体病毒是美国白蛾核型多角体病毒; 所述的将细胞穿膜肽C105Y与脂质纳米颗粒表面的DSPE-PEG2000-Mal连接是: 细胞穿膜肽C105Y和DSPE-PEG2000-Mal溶解在无水二甲基甲酰胺中,加入二碳酸二叔丁酯,氮气条件下避光冰浴,搅拌,随后加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,搅拌,再加入二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-氨基,搅拌,再加入盐酸,搅拌,调节pH,透析,透析袋内的物质冷冻干燥后得终产物DSPE-PEG2000-C105Y; 所述的用其去制成脂质纳米颗粒LNP-C105Y,并包载核型多角体病毒DNA,获得DNAHcNPV@LNP-C105Y是: 将美国白蛾核型多角体病毒DNA溶解无酶无菌水中,形成水相溶液; 按摩尔比25:5:19.3:0.8:50称取活性脂质DLin-MC3-DMA、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC、DSPE-PEG2000-C105Y和阳离子脂质DOTAP,加入含无水乙醇与氯仿1:2vv混合溶剂中,水浴超声使其充分溶解形成有机相后于45℃旋转蒸发减压除去有机溶剂,加入含美国白蛾核型多角体病毒DNA的无酶无菌水水合40min,使美国白蛾核型多角体病毒DNA与有机相质量比为6:100,将其置于超声细胞破碎仪中超声15min使体系分散,用脂质体挤压器依次过400nm,200nm的聚碳酸酯膜,即得DNAHcNPV@LNP-C105Y混悬液,透析除去杂质,加入蔗糖,经冷冻干燥制成冻干制剂DNAHcNPV@LNP-C105Y。
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