湖南工程学院张何获国家专利权
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龙图腾网获悉湖南工程学院申请的专利基于脱氧核酶激活的沙门氏菌活菌检测体系及其方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121575133B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202610123987.9,技术领域涉及:C12Q1/689;该发明授权基于脱氧核酶激活的沙门氏菌活菌检测体系及其方法是由张何;杨宁;马文杰;蒋佳林;欧阳宜笑;傅昕设计研发完成,并于2026-01-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于脱氧核酶激活的沙门氏菌活菌检测体系及其方法在说明书摘要公布了:本申请属于生物分析检测技术领域,具体公开了基于脱氧核酶激活的沙门氏菌活菌检测体系及其方法,该检测体系包括Sub探针、脱氧核酶探针、发夹链探针、超支化树状纳米分子、crRNACas12a二元复合物、荧光探针和磁珠,超支化树状纳米分子包括底物A、底物B和触发链B探针,底物A由A‑F链探针、A‑Q链探针和辅助链A探针组成,底物B由B‑F链探针、B‑Q链探针和辅助链B探针组成。本申请检测体系,通过特异性识别仅由活体沙门氏菌代谢所释放的核糖核酸酶H2,并利用其激活Sub‑Dz底物,从源头上确保了只有活菌才能触发后续反应,有效解决了死菌干扰这一难题,实现对沙门氏菌活菌的高灵敏、高特异性快速检测。
本发明授权基于脱氧核酶激活的沙门氏菌活菌检测体系及其方法在权利要求书中公布了:1.一种非用于疾病诊疗目的检测沙门氏菌活菌的方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、探针预处理:分别将Sub探针、脱氧核酶探针、触发链B探针、A-F链探针、A-Q链探针、辅助链A探针、B-F链探针、B-Q链探针、辅助链B探针、crRNA和荧光探针的冻干粉分别用DEPC水配制成100µM溶液;将发夹链探针加入退火缓冲液退火形成发夹结构; S2、超支化树状纳米分子的合成:将A-F链探针和A-Q链探针溶液混合后再加入TAE缓冲液进行反应,然后加入辅助链A探针溶液混合孵育得到底物A;将B-F链探针和B-Q链探针溶液混合后再加入TAE缓冲液进行反应,然后加入辅助链B探针溶液混合孵育得到底物B;将底物A和底物B溶液混合并加入触发链B探针,反应得到超支化树状纳米分子溶液; S3、靶标的获取与发夹链的处理:将Sub探针、脱氧核酶探针、DEPC水和缓冲液混合进行杂交反应,然后加入待测液混合孵育,孵育后再加热将脱氧核酶灭活,最后加入发夹链探针溶液混合均匀,得到预处理待测液; S4、信号检测:用缓冲液洗涤磁珠,然后加入步骤S3得到的预处理待测液反应,使预处理待测液中打开的发夹链探针连接到磁珠表面,反应结束后在磁分离器上吸去上清液并用HEPES缓冲液振荡洗涤剩余产物,洗涤后再加入所述步骤S2中制得的超支化树状纳米分子溶液和HEPES缓冲液进行反应,反应结束后在磁分离器上吸去上清液并用HEPES缓冲液振荡洗涤剩余产物,然后加入crRNA探针、Cas12a蛋白和DEPC水混合反应,接着加入荧光探针避光反应,最后灭活Cas12a蛋白并用荧光分光光度计进行荧光强度测定; 所述Sub探针的序列如SEQIDNO.1所示,所述脱氧核酶探针的序列如SEQIDNO.2所示,所述触发链B探针的序列如SEQIDNO.4所示,所述发夹链探针的序列如SEQIDNO.5所示,所述A-F链探针的序列如SEQIDNO.6所示,所述A-Q链探针的序列如SEQIDNO.7所示,所述辅助链A探针的序列如SEQIDNO.8所示,所述B-F链探针的序列如SEQIDNO.9所示,所述B-Q链探针的序列如SEQIDNO.10所示,所述辅助链B探针的序列如SEQIDNO.11所示,所述crRNA的序列如SEQIDNO.12所示。
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