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龙图腾网获悉浙江大学医学院附属第一医院申请的专利一种靶向特异肿瘤细胞的T细胞受体库构建方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115109140B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-28发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210697776.8，技术领域涉及：C07K14/725；该发明授权一种靶向特异肿瘤细胞的T细胞受体库构建方法是由徐玉林;黄河;钱鹏旭;于晓虹;单威;曾祥钧设计研发完成，并于2022-06-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种靶向特异肿瘤细胞的T细胞受体库构建方法在说明书摘要公布了：本发明提供一种靶向特异肿瘤细胞的T细胞受体库构建方法，主要基于特定个体稳态外周血单个核细胞扩增的细胞建立的人源化小鼠模型，该人源化小鼠具有人的树突状细胞、单核细胞以及各类T细胞亚群，然后将特定肿瘤细胞。本发明具有特定个体的免疫学特征、靶向肿瘤细胞的特异性，可被用作治疗和研究平台，也提供可识别NALM6和乳腺癌肿瘤细胞株MDADB抗原的TCR‑T库,该平台可用于病人肿瘤特别是复发难治性肿瘤TCR库的筛选和治疗，也为嵌合抗原受体T细胞设计特异性靶向序列提供技术平台，适用于免疫组学的生物医学研究、基础生物学研究、嵌合抗原受体免疫细胞包括T细胞结构的设计以及免疫治疗等。

本发明授权一种靶向特异肿瘤细胞的T细胞受体库构建方法在权利要求书中公布了：1.一种靶向特异肿瘤细胞的T细胞受体库构建方法，其特征在于，通过以下步骤实现： 1利用外周血单个核细胞制备造血干祖细胞： 外周血用淋巴细胞分离液梯度离心，获取白膜层中的单个核细胞，用不含Ca2+和Mg2+的磷酸盐缓冲盐水洗涤2-3次，用自组装多肽水凝胶L-精氨酸、甘氨酸和L-天冬氨酸组成的自组装多肽RGD培养单个核细胞； 2人源化小鼠的建立： 步骤1的细胞经自组装多肽RGD培养10-15天后，用胰蛋白酶-EDTA处理扩增的细胞，过滤后，用磷酸盐缓冲盐水清洗2-3次，取7-8周龄的NOD-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22Nju小鼠，用1.8格雷照射，4小时后，将处理过的细胞按照7-8X105个细胞通过胫骨注射给小鼠，移植后第三周，用流式细胞术分析人类免疫细胞的嵌合和类型； 3人源化小鼠接种丝裂霉素灭活的肿瘤细胞NALM6和MDA-MB-231 应用两种肿瘤细胞系，一是B细胞前体白血病细胞系NALM6，二是三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231，NALM6细胞在含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养，MDA-MB-231细胞在含有10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中培养，上述两种细胞系都带有绿色荧光蛋白；进入对数期后，用10mgmL丝裂霉素C抑制DNA合成和核分裂2-3小时，然后收集细胞，每种肿瘤细胞以1×106个细胞经尾静脉分别注射到人源化小鼠体内，在第7天进行强化治疗1次； 4T细胞受体B链互补决定区序列文库的构建 从人源化小鼠中收集人类T细胞，并用EasySep人类CD3阳性选择试剂盒II进行纯化，使用Trizol试剂提取总RNA，用1.2％琼脂糖凝胶检测28S-和18S-RNA转录条带，以检测RNA的完整性，利用ImmuHubTCR技术对T细胞受体B链进行高通量测序和建库； 5TRBCDR3库的克隆性特征分析 FASTA序列的数据集被提交给IMGThighVQUEST进行基因解释，以构建癌症靶向TRBCDR3基因库，获得每个克隆的信息，包括克隆数、克隆频率、CDR3基因序列、CDR3氨基酸序列、V、D、J和C段，分析各组的TRBCDR3库的相似性和差异性，分别分析克隆类型、数量的多样性和克隆增殖，通过比较各组CDR3的相同AA序列，计算每个克隆型的总数量，进一步的分析各组克隆共享中增加的TRB克隆型及其频率变化；为了计算免疫刺激条件下的新产物，进一步计算新克隆型的特征，数量和频率； 6荷瘤小鼠模型的建立 NALM6细胞在含有10％胎牛血清FBS的RPMI-1640培养基中培养，MDA-MB-231乳腺癌细胞在含有10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基DMEM中培养，将300μLPBS稀释的1×106NAML6-EGFP和1×106MDA-MB-231-EGFP细胞悬浮液经尾静脉注入NCGs小鼠体内，在移植20天用流式细胞仪测量肿瘤体内生长情况；评估小鼠的生存时间。

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