郑州大学侯琳获国家专利权
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龙图腾网获悉郑州大学申请的专利一种工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物的制备方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117462675B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311428991.9,技术领域涉及:A61K41/00;该发明授权一种工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物的制备方法及其应用是由侯琳;梁成林;杨晗笑;李彤彤;丁馨怡;李欣妮;蒋晓娟设计研发完成,并于2023-10-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物的制备方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明涉及工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物的制备方法及其应用,可有效解决激活STING通路,逆转T细胞耗竭,提高肿瘤免疫治疗效果,保证癌症治疗用药效果的问题,将黑色素制备成黑色素纳米粒,并通过硫代苹果酸反应形成羧基化的黑色素纳米粒,通过酰胺化反应在黑色素纳米粒的羧基端分别修饰多肽链和2‑氰基‑6‑氨基‑苯并噻唑,再通过金属络合作用将金属离子络合在功能化黑色素纳米粒表面,最后利用黏附作用将功能化黑色素纳米体系黏附在工程化大肠杆菌表面,得到工程菌负载功能化黑色素纳米体系的复合物;本发明操作方便,方法稳定可靠,生物相容性好、滞留时间长,可发挥靶向肿瘤、激活cGAS‑STING通路,阻断PD‑1PD‑L1轴,逆转T细胞耗竭等多重功效。
本发明授权一种工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物的制备方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物的制备方法,其特征在于,将黑色素制备成黑色素纳米粒,并通过硫代苹果酸反应形成羧基化的黑色素纳米粒,通过酰胺化反应在黑色素纳米粒的羧基端分别修饰多肽链和2-氰基-6-氨基-苯并噻唑,再通过金属络合作用将金属离子络合在功能化黑色素纳米粒表面,最后利用黏附作用将功能化黑色素纳米体系黏附在工程化大肠杆菌表面,得到工程菌负载功能化黑色素纳米体系的复合物;具体包括以下步骤: 1、制备黑色素纳米粒MNP:取黑色素5-12mg溶于的0.1molL氢氧化钠5-10mL中,冰浴超声0.5h;加入0.1molL的稀盐酸调节pH为6.5-7.5,用MWCO为2500Da的透析袋透析6h,冻干,得黑色素纳米粒,粒径为20nm~60nm; 2、制备羧基化的黑色素纳米粒:取步骤1中的5-12mg黑色素纳米粒溶于8-10mL溶剂中,加入6-8mg硫代苹果酸,室温下搅拌6-8h,用MWCO为12000Da的透析袋透析48h,冻干,得羧基化的黑色素纳米粒; 所述溶剂为超纯水、pH7.4的PBS缓冲液、DMF、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中的一种; 3、制备多肽链修饰的黑色素纳米粒MNP-pep:称取步骤2中的8-12mg羧基化的黑色素纳米粒溶于溶剂中,加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺8-12mg,N-羟基琥珀酰亚胺6-10mg,室温下避光搅拌3-5h,加入多肽链5-9mg,加入0.1molL的氢氧化钠调节pH至7.5-8.0,在氮气下避光搅拌24h,用MWCO为12000Da的透析袋透析24h,冻干后得到多肽链修饰的黑色素纳米粒; 所述的多肽链为含有Ala-Ala-Asn-Cys-Lys丙氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-半胱氨酸-赖氨酸序列的多肽链; 4、制备2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修饰的黑色素纳米粒MNP-CABT:称取8-12mg羧基化的黑色素纳米粒溶于溶剂中,加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺8-12mg,N-羟基琥珀酰亚胺6-10mg,室温下避光搅拌3-5h,称取2-氰基-6-氨基-苯并噻唑3-7mg溶于溶剂中,加入反应体系中,加入0.1molL的稀盐酸调节pH至7.5-8.0,在氮气下避光搅拌24h,用MWCO为12000Da的透析袋透析24h,冻干,得2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修饰的黑色素纳米粒; 5、制备负载金属离子的黑色素纳米粒MNP-pamp;C@Mn:称取步骤3下的多肽链修饰的黑色素纳米粒8-12mg,金属盐1.0-2.5mg分别溶于溶剂中,通过超声使其溶解,两者混合均匀后40℃下反应1h,然后装入MWCO为12000Da的透析袋透析48h,得到负载金属离子的多肽链修饰的黑色素纳米粒; 制备负载金属离子的2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修饰的黑色素纳米粒:称取步骤4下的2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修饰的黑色素纳米粒8-12mg,金属盐1.0-2.5mg分别溶于溶剂中,通过超声使其溶解,两者混合均匀后40℃下反应1h,然后装入MWCO为12000Da的透析袋透析48h,得到负载金属离子的2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修饰的黑色素纳米粒; 所述金属离子为锰离子、锌离子中的一种; 6、制备工程菌负载功能化黑色素纳米体系复合物MNP-pamp;C@Mn-BP:称取步骤5的负载金属离子的多肽链修饰的黑色素纳米粒0.5-2mg和负载金属离子的2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修饰的黑色素纳米粒0.5-2mg分散于0.5-2mL的溶剂中,再加入0.5-1.5mL工程化的大肠杆菌Tris-HCl缓冲液108CFUmL,室温搅拌3h,8000rpm离心10min,弃上清液,沉淀用无菌Tris-HCl缓冲液重悬,得到工程菌负载功能化黑色素纳米体系的复合物; 所述工程化的大肠杆菌为导入PD-1、PD-L1质粒工程菌中的一种。
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