京美生命科技(杭州)有限公司张海心获国家专利权
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龙图腾网获悉京美生命科技(杭州)有限公司申请的专利一种植物外泌体的纯化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121022721B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511553864.0,技术领域涉及:C12N5/04;该发明授权一种植物外泌体的纯化方法是由张海心;李华伟设计研发完成,并于2025-10-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种植物外泌体的纯化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种植物外泌体的纯化方法,属于生物分离技术领域,该方法包括:获取植物汁液或组织提取液,经粗滤和离心预处理后,与表面修饰有羧基或环氧基的磁性微球在含钙离子的缓冲液中孵育,利用外部磁场捕获复合物,清洗后采用含N‑乙酰氨基葡萄糖的竞争性洗脱缓冲液进行洗脱,最后通过尺寸排阻色谱柱进一步纯化,获得植物外泌体。本发明通过磁性微球特异性捕获外泌体,结合竞争性洗脱和尺寸排阻色谱的双重纯化策略,显著提高了外泌体的回收率和纯度,操作简便、耗时短、重复性好,适用于多种植物来源的外泌体规模化制备,该方法制备的植物来源的外泌体可应用于药物递送系统、化妆品、呼吸健康及感官健康方面的产品开发等领域。
本发明授权一种植物外泌体的纯化方法在权利要求书中公布了:1.一种番茄叶片外泌体的纯化方法,其特征在于,包括以下步骤: 获取番茄叶片组织提取液,经粗滤和离心去除大颗粒杂质后得预处理液; 将预处理液与经修饰后的磁性微球在缓冲条件下混合孵育; 孵育完成后施加外部磁场捕获结合了番茄叶片外泌体的磁性微球并采用缓冲液清洗后得磁性微球-外泌体复合物; 向所述磁性微球-外泌体复合物中加入含有N-乙酰氨基葡萄糖的竞争性洗脱缓冲液孵育后得洗脱液; 将所得洗脱液立即上样至预平衡的尺寸排阻色谱柱,收集目标液,即获得高纯度的番茄叶片外泌体; 所述修饰后的磁性微球为表面富含羧基的聚苯乙烯磁性微球,所述聚苯乙烯磁性微球的粒径为1-3μm; 所述竞争性洗脱缓冲液中的N-乙酰氨基葡萄糖浓度为5-20wt%; 所述尺寸排阻色谱柱的填料为表面经聚乙二醇修饰的多孔二氧化硅微球,其孔径为30-50nm,粒径为5-10μm,且填料表面修饰的聚乙二醇分子量为2000-5000Da,修饰密度为0.5-1.2mgm²; 所述竞争性洗脱缓冲液中还包含0.1-0.5wt%的壳聚糖寡糖; 所述修饰后的磁性微球在孵育前经预活化处理,预活化液为含有0.5-1.5wt%1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐的MES缓冲液; 所述预活化处理时间为20–40分钟,温度为20–25℃; 所述缓冲条件为含有0.1wt%-0.5wt%CaCl2的磷酸盐缓冲液; 所述预处理液中添加有0.05-0.2wt%的聚乙二醇辛基苯基醚。
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